Alergické diagnostické testy

Alergické diagnostické testy

Alergické diagnostické metody. Jsou prováděny poté, co byla důkladně odebrána řada podezřelých alergenů. Vzorky se provádějí mimo fázi exacerbace onemocnění a ne dříve než o 2-3 týdny později. po akutní alergické reakci, protože citlivost těla na alergen během této doby klesá.

Rozlišujte mezi pokožkou a provokativem A. d. P. Kožní testy jsou založeny na identifikaci specifické senzibilizace těla zavedením alergenu přes kůži. Současně se hodnotí velikost a povaha vyvíjející se zánětlivé odpovědi. Rozlišujte mezi kvalitativními a kvantitativními kožními testy. Pomocí kvalitních kožních testů se stanoví přítomnost nebo nepřítomnost senzibilizace na tento alergen. Tyto testy se používají při diagnostice alergických a některých infekčních alergických onemocnění (tuberkulóza, brucelóza atd.) A parazitárních onemocnění (helmintiáza). Kvantitativní kožní testy poskytují představu o míře senzibilizace těla. S jejich pomocí se stanoví minimální koncentrace konkrétního alergenu, při které vyvolá viditelnou alergickou reakci u senzibilizovaného organismu. Tato metoda se nazývá alergická titrace. S jeho pomocí je nastavena dávka alergenu, pomocí které je možné zahájit specifickou hyposenzibilizaci (snížení úrovně senzibilizace) zavedením alergenu do těla.

V závislosti na použité technice mohou být kožní testy přímé nebo nepřímé. V přímých kožních testech je alergen injikován intradermálně nebo poškozením epidermis pícháním nebo poškrábáním. Při přímých kožních testech kapáním a aplikací se alergen (obvykle lék nebo látka) aplikuje na neporušenou pokožku ve formě kapky nebo aplikace. Kožní reakce je považována za pozitivní, když dojde k hyperemii, infiltraci nebo tvorbě puchýřů. Může nastat do 20 minut (okamžitá reakce), po 6-12 hodinách (reakce přechodného typu), po 24-48 hodinách (opožděná reakce). Typ kožní odpovědi závisí na povaze imunologického mechanismu alergické reakce (viz Alergie). Z přímých kožních testů různých typů je nejcitlivější intradermální, následovaný vertikutací, injekcí, aplikací, kapáním.

Nepřímé kožní testy zahrnují Prausnitz-Küstnerovu reakci, při které se pacientovo krevní sérum vstřikuje intradermálně zdravému člověku a po fixaci protilátek na kůži příjemce (po 24 hodinách) se na stejné místo vstřikuje alergen. Vývojem lokální kožní reakce se hodnotí přítomnost reaginových protilátek v testovacím séru. Tato reakce nevylučuje možnost přenosu patogenu do krevního séra v přítomnosti latentní infekce u dárce, proto je jeho použití omezené. Nejvhodnější je detekovat reaginové protilátky pomocí různých imunitních reakcí - enzymová imunotest atd. (Viz Metody imunologického výzkumu). Volba typu kožního testu závisí na nemoci, očekávaném stupni citlivosti, povaze alergenu a také na reaktivitě kůže. Užívání některých léků (antihistaminika, sedativa) dramaticky snižuje reaktivitu pokožky, proto je před alergickým vyšetřením nutné upustit od užívání těchto léků po dobu 5-7 dnů.

Při diagnostice alergických onemocnění nelze zcela spoléhat na kožní testy a přeceňovat jejich výsledky. Kožní testování a hodnocení jejich výsledků provádí pouze speciálně vyškolený zdravotnický personál.

Pokud existuje nesrovnalost mezi údaji o alergické anamnéze a výsledky kožních testů během období remise, jsou uvedeny provokativní testy. Tyto testy jsou založeny na reprodukci alergických reakcí zavedením alergenu do orgánu nebo tkáně, jehož porážka vede k obrazu nemoci. Existují provokativní testy spojivky, nosu a inhalace. Konjunktivální provokativní test se provádí instilací alergenu do dolního spojivkového vaku. Reakce je považována za pozitivní, když se objeví hyperemie spojivek, slzení a svědění očních víček. Provádí se nazální provokativní test na alergickou rýmu a sennou rýmu: do jedné poloviny nosu se nakape alergen a do druhé kontrolní tekutina. Reakce je považována za pozitivní, pokud se vyskytnou potíže s nasálním dýcháním a svěděním na straně instilace alergenu. Pro etiologickou diagnostiku bronchiálního astmatu se používá provokativní test pro inhalaci: pacient pomocí aerosolového spreje vdechuje roztok alergenu ústy. Reakce je považována za pozitivní, pokud je vitální kapacita plic snížena o více než 15%.

Provokativní testy zahrnují také studené a tepelné testy používané pro studenou a teplou kopřivku (Urticaria). Pokud neexistují jasné známky onemocnění, provede se provokativní test expozice. Je založen na přímém kontaktu pacienta s podezřením na alergen v prostředí, ve kterém se obvykle nachází. Opakem tohoto testu je eliminační test - vyloučení údajného alergenu ze stravy, přesun pacienta trpícího domácími alergiemi na takzvané oddělení bez alergií atd. Při diagnostice potravinové alergie (alergie na potraviny) a alergie na léky se používají leukocytopenické a trombocytopenické provokativní testy (... Tyto testy jsou založeny na snížení počtu leukocytů a krevních destiček v krvi po podání testovaného alergenu pacientovi..

Bibliografie: Clinical Immunology and Allergology, ed. L. Yeager, trans. s tím, t. 1-3, M., 1986; Pytskiy V.I., Adrianova N.V. a Artomasov A. In Allergic choroby, M., 1984; Moderní praktická alergologie, ed. PEKLO. Ado a A.A. Polnera, M., 1963.

Alergická metoda pro diagnostiku infekčních onemocnění je

Alergické testy - biologické reakce pro diagnostiku řady onemocnění na základě zvýšené citlivosti těla způsobené alergenem.

U mnoha infekčních onemocnění se díky aktivaci buněčné imunity vyvíjí zvýšená citlivost těla na patogeny a jejich metabolické produkty. Na tom jsou založeny alergické testy používané k diagnostice bakteriálních, virových, protozoálních infekcí, mykóz a helmintiózy. Alergické testy mají specifičnost, ale u těch, kteří byli nemocní a očkovaní, jsou často pozitivní.

Všechny alergické testy jsou rozděleny do dvou skupin - in vivo a in vitro testy.

Alergická metoda pro diagnostiku infekčních nemocí

U řady infekčních onemocnění je tělo přecitlivělé na bakterie způsobující alergeny. Tento jev pomáhá stanovit etiologickou diagnózu. V některých případech se specifická bakteriální alergie vytvoří brzy, v prvních dnech onemocnění, což se používá k včasné diagnostice tularemie (intradermální alergický test s tularinem se stane pozitivní 2. - 3. den).

V jiných případech dojde k alergické restrukturalizaci těla později a v zájmu retrospektivní diagnózy lze použít identifikaci konkrétní alergie. K léčbě pacientů s určitými chronickými formami onemocnění se používají metody hyposenzibilizace těla pomocí vhodných alergenů. Terapeutické použití bakteriálních alergenů je oprávněné v případech, kdy antibiotická léčba a jiné způsoby léčby nebudou úspěšné a onemocnění bude mít chronický opakující se průběh.

Tyto nosologie v současné době zahrnují řadu infekčních onemocnění, která způsobují chronické formy nepulmonální tuberkulózy (poškození sítnice), brucelózy (opakující se myokarditida), toxoplazmózy (poškození pohybového aparátu).

Alergické testy (kožní a intradermální) získaly univerzální uznání v diagnostice bakteriálních infekcí, jako je tularemie, brucelóza (Burneův test), tuberkulóza (Pirquetův kožní test a Mantouxův intradermální test), toxoplazmóza, plísňové kožní léze, soplíky a rickettsióza (horečka Q). Nejjednodušší je kožní alergický test ve srovnání s intradermálními a jinými metodami podávání alergenů.

Technika intradermálního alergického testu je následující: kapka alergenu se aplikuje na flexorový povrch předloktí nebo na kůži ramene (po ošetření 70% alkoholem) a provede se lehká skarifikace (bez výskytu krve!). Pozitivní test (po 24 a 48 hodinách) v přítomnosti senzibilizace těla na injikovaný alergen se projevuje zánětlivou reakcí různé intenzity: zarudnutí, otok, tvorba puchýřů, někdy s pocitem místního svědění a pálení.

Závažnost reakce a její trvání závisí na stavu senzibilizace těla a koncentraci bakteriálního alergenu (například při diagnostice tuberkulózy by neměla být vyšší než 1:10 000 (!) Aby nedocházelo k fokálním reakcím v plicích, postupuje se destrukcí (!) Plicní tkáně).

Diagnostika virových infekcí

Laboratorní diagnostika virových infekcí je založena na detekci viru a protilátek proti němu. Materiálem pro studium jsou biologické tekutiny v těle a tkáních, kde se virus nachází v největším množství. V závislosti na povaze a stadiu onemocnění se vyšetřuje krev, mozkomíšní mok, výtok spojivky, močové trubice, děložního čípku, hlenu z nosohltanu, výkaly, moč a kousky orgánové tkáně získané pomocí biopsie nebo z mrtvoly..

Pro virologické studie se materiál od pacienta injektuje do různých laboratorních zvířat, do kuřecích embryí a tkáňových kultur; Volba materiálu a metody výzkumu je dána tropismem viru, který je vlastní různým virovým infekcím, a jeho schopností množit se in vivo a in vitro. Identifikace viru se provádí pomocí specifických metod využívajících sérologické testy.

V posledních letech se pro diagnostiku používá polymerázová řetězová reakce (PCR); rozsah indikace různých virů touto metodou se rychle rozšiřuje. V současné době byla vyvinuta virologická diagnostika hepatitidy A, B, C, D, G, TTV; stanovení herpes virů, cytomegalovirů, HIV atd. Určete nejen jejich přítomnost ve zkušebním materiálu (krev atd.), ale také počet virových částic (tzv. „virová zátěž“ - stupeň virémie a replikace viru), což je důležité nejen pro diagnostika, ale také pro dynamické sledování průběhu onemocnění a pro hodnocení účinnosti antivirové léčby (množství viru klesá, dokud nezmizí).

Spolu s PCR si některé rutinní laboratorní metody pro diagnostiku virových infekcí zachovávají svůj význam: přímá mikroskopie nosních výtěrů pro stanovení DNA a RNA virů; reakce imunofluorescence (RIF), nepřímá imunofluorescence (RNIF) v diagnostice chřipky a jiných akutních respiračních virových infekcí; izolace čistých kultur chřipkových virů k určení jejich typu.

RSK se široce používá ke stanovení titru protilátek u pacientů v průběhu onemocnění; reakce inhibice hemaglutinace (RTGA), která umožňuje určit stupeň specifické imunologické odpovědi těla; také se používají neutralizační reakce, srážení na agaru a mnoho dalších speciálních virologických metod.

Význam sérologických a alergických metod při diagnostice infekčních onemocnění.

Sérologická metoda je založena na stanovení specifických protilátek v krvi proti odpovídajícím patogenům pomocí různých reakcí (aglutinace, pasivní hemaglutinace atd.). Sérologické reakce se používají pro následující účely: 1) známým antigenem (diagnostické), obsah protilátek proti němu se stanoví v séru, 2) známou protilátkou (diagnostické sérum), v materiálu se stanoví mikrobiální antigen nebo se identifikuje izolovaný patogen.

Alergická metoda je založena na detekci zvýšené citlivosti makroorganismu na určité patogeny infekčních chorob nebo produkty jejich vitální aktivity. Pro alergické testy se používají léky, které se nazývají alergeny..

5. Hlavní skupiny faktorů patogenity bakterií:

1) adhezní faktory,

2) faktory invaze,

3) faktory zabraňující fagocytóze,

4) faktory potlačující fagocytózu,

5) enzymy „obrany a agrese“,

6) mikrobiální toxiny (endo- a exotoxiny).

6. Jaké faktory patogenity zabraňují fagocytóze a jaké potlačují fagocytózu?

Faktory zabraňující fagocytóze blokují stádia 1 a 2 fagocytózy. Jedná se o kapsli, složky buněčné stěny - plazmatická koaguláza, peptidoglykan, protein A, protein M, kyseliny teichoové atd. Tyto faktory buď maskují bakterie (kyselina hyaluronová v kapsli), nebo potlačují aktivitu fagocytů.

Faktory potlačující fagocytózu blokují oxidativní výbuch, což vede k neúplné fagocytóze. Jedná se o mikrokapsli, životnost bakterií, antigeny V-W atd..

Faktory adheze a kolonizace bakterií, jejich podstata a význam.

Faktory adheze a kolonizace jsou počátečními spouštěcími mechanismy nemoci. S jejich pomocí bakterie rozpoznávají receptory na buněčných membránách, posilují a kolonizují buňky. Mezi tyto faktory patří složky buněčné stěny: fimbrie (krátké výrůstky), proteiny vnější membrány, lipopolysacharid, peptidoglykan, teichoové kyseliny (G +).

8. Jaké jsou faktory invaze? Jak mohou být zastoupeni?

Faktory invaze jsou faktory, kterými bakterie vstupují do buňky. V G - mohou být reprezentovány proteiny vnější membrány. Zahrnuje také například enzym hyaluronidázu, která ničí pojivovou tkáň.

9. Jaké enzymy „obrany a agrese“ bakterií znáte? Metody jejich detekce v bakteriích.

Enzymy „obrany a agrese“ podporují šíření bakterií v tkáních těla. Patří mezi ně plazmatická koaguláza, fibrinolytický enzym, lecitináza, hyaluronidáza, DNáza atd..

K detekci hyaluronidázy se králíkovi intradermálně vstříkne 0,2 ml řasenky ve fyziologickém roztoku do jedné oblasti depilované kůže a 0,2 ml jatečně upraveného těla s přídavkem filtrátu kultivačního média ze stafylokoků do sousední oblasti. Skvrna v místě vpichu řasenky s filtrátem po 24-48 hodinách je několikanásobně větší než skvrna v místě vpichu řasenky bez filtrátu kvůli zvýšené permeabilitě tkáně v přítomnosti hyaluronidázy.

Pro detekci fibrinolytického enzymu se testovaná kultura naočkuje do Petriho misek agarovým médiem obsahujícím plazmu. Po inkubaci po dobu 24-48 hodin při 37 stupních se kolem kolonií vytvoří clearingová zóna bakterií produkujících fibrinolysin.

Pro detekci plazmatické koagulázy se testovaná kultura naočkuje 0,2 ml citrátové králičí nebo lidské plazmy. V případě produkce plazmatické koagulázy dochází ke srážení plazmy 2-4-6-18 hodin po inkubaci při 37 stupních. Při kontrole zůstává plazma kapalná.

K identifikaci lecitinázy se studovaná kultura naočkuje na žloutkový agar. v přítomnosti lecitinázy se kolem bakteriálních kolonií vytvoří zóna zákalu a duhová koruna.

Alergická metoda pro diagnostiku infekčních nemocí

Alergické testy - biologické reakce pro diagnostiku řady onemocnění na základě zvýšené citlivosti těla způsobené alergenem.

U mnoha infekčních onemocnění se díky aktivaci buněčné imunity vyvíjí zvýšená citlivost těla na patogeny a jejich metabolické produkty. Na tom jsou založeny alergické testy používané k diagnostice bakteriálních, virových, protozoálních infekcí, mykóz a helmintiózy. Alergické testy mají specifičnost, ale u těch, kteří byli nemocní a očkovaní, jsou často pozitivní.

Všechny alergické testy jsou rozděleny do dvou skupin - in vivo a in vitro testy.

Alergické testy in vitro jsou založeny na detekci senzibilizace mimo tělo pacienta. Používají se, když z nějakého důvodu nelze provést kožní testy, nebo v případech, kdy kožní reakce dávají nejasné výsledky..

K provádění alergických testů se používají alergeny - diagnostické léky určené k detekci specifické senzibilizace těla. Infekční alergeny používané při diagnostice infekčních nemocí jsou čištěné filtráty živných kultur, méně často suspenze zabitých mikroorganismů nebo z nich izolované AG..

Kožní testy.Infekční alergeny injekčně zpravidla intradermálně nebo kutánně vtíráním do skarifikovaných oblastí pokožky. Při intradermální metodě se 0,1 ml alergenu vstřikuje do střední třetiny předního předloktí speciální tenkou jehlou. Po 28 - 48 hodinách se vyhodnotí výsledky HRT reakce a určí se velikost papule v místě vpichu.

Neinfekční alergeny (rostlinný pyl, domácí prach, potravinářské výrobky, léky a chemické přípravky) se vstříknou do kůže injekcí (prick test), kožní pomocí vertikutace a tření nebo intradermální injekcí zředěného roztoku alergenu. IHN se používá jako negativní kontrola a jako pozitivní kontrola se používá roztok histaminu. Výsledky se berou v úvahu do 20 minut (GNT) podle velikosti papul (někdy až do průměru 20 mm), přítomnosti otoku a svědění. Intradermální testy se provádějí v případě negativního nebo sporného výsledku píchnutí. Ve srovnání s druhým je dávka alergenu snížena o 100-5 000krát.

Kožní testy na přítomnost HRT se široce používají k detekci infekce lidí s Mycobacterium tuberculosis (test Mantoux), původců brucelózy (Burneův test), malomocenství (Mitsudova reakce), tularemie, sopel, aktinomykózy, dermatomykózy, toxoplazmózy, některých helmintóz atd..

In vitro vzorky. Tyto metody výzkumu jsou pro pacienta bezpečné, velmi citlivé a umožňují kvantifikovat úroveň alergizace těla..

V současné době byly vyvinuty testy ke stanovení senzibilizace na základě reakcí T- a B-lymfocytů, tkáňových bazofilů, detekce obecných specifických IgE v krevním séru atd. Patří sem reakce inhibice migrace leukocytů a blastové transformace lymfocytů, tvorba specifické růžice, Shelleyův bazofilní test, degranulační reakce tkáňových bazofilů i alergosorbentní metody (stanovení specifického IgE v krevním séru).

Inhibice reakce migrace leukocytů (RTML). TML je založen na potlačení migrace monocytů a jiných leukocytů pod vlivem mediátorů produkovaných senzibilizovanými lymfocyty v přítomnosti specifického alergenu.

Reakce transformace lymfocytů (RBT). Tato reakce je založena na schopnosti normálních lymfocytů periferní krve vstupovat do mitózy a během jejich kultivace in vitro se proměnit ve formy blastu pod vlivem specifických faktorů - alergenů a nespecifických stimulátorů mitogeneze - mitogenů (fytohemaglutinin, konkanavalin A a lipopolysacharidy) jiné látky).

Reakce tvorby specifické růžice.Růžice jsou charakteristické útvary, které vznikají in vitro v důsledku adheze erytrocytů k povrchu imunokompetentních buněk. Rosetting může nastat spontánně, protože lidské T-lymfocyty obsahují receptory pro ovčí erytrocyty. Spontánní tvorba růžice u zdravých lidí je 52 - 53% a slouží jako indikátor funkčního stavu T-lymfocytů. Tento jev se také reprodukuje, pokud se použijí erytrocyty, na které jsou fixovány odpovídající alergeny..

Reakce degranulace tkáňových bazofilů Metoda je založena na skutečnosti, že při působení alergenu dochází k degranulaci tkáňových bazofilů krysy, dříve senzibilizované cytofilním AT z krevního séra pacienta..

Shelleyův bazofilní test. Je známo, že lidské nebo králičí bazofilní granulocyty také degranulují v přítomnosti séra pacienta a alergenu, na který je pacient citlivý..

Stanovení IgE protilátek in vitro. Laboratorní diagnostika onemocnění na základě GNT je založena na stanovení alergenově specifických IgEanti-IgE. Při použití radioaktivního štítku se metoda nazývá radioalergosorbentní test (PACT), ale častěji se jako štítek používá enzym nebo fluorescenční látka (FAST). Doba analýzy - 6 - 7 hodin. Princip metody: známý alergen fixovaný na pevné bázi se inkubuje s pacientovým krevním sérem; sérum specifické IgE anti-IgE se váže na alergen, a tak zůstává fixováno na substrátu a může specificky interagovat s přidaným značeným anti-IgE.

MedGlav.com

Lékařský adresář nemocí

Diagnostika alergických onemocnění. Anamnéza, vzorky, testy, imunologické studie na alergie.

ZÁSADY DIAGNOSTICKÉ ALERGIE.


Úkoly diagnostiky alergického onemocnění jsou:

  • Zjištění povahy choroby (alergické nebo nealergické). Často to lze stanovit na základě charakteristických stížností pacienta a klinického obrazu onemocnění (například senná rýma, sérová nemoc). Někdy však vznikají značné potíže (například neobvyklé reakce na užívání léků, jídla atd.);
  • Je nutné rozlišovat, zda je dané alergické onemocnění skutečně alergické nebo pseudoalergické, to znamená, že je nutné určit míru účasti imunitních a neimunitních mechanismů na rozvoji tohoto onemocnění;
  • Je důležité zjistit příčinu onemocnění. Znalost příčiny spolu se zjištěním skutečné alergické povahy procesu vede k dalšímu adekvátnímu průběhu léčby, jmenování specifické hyposenzibilizace.

Zvláštností vyšetřovacích metod je rozšířené používání specifických diagnostických testů in vivo a laboratoří.


ALERGOLOGICKÁ ANAMNÉZA.


Pod vedením akademika Akademie lékařských věd SSSR A. Ada byl vyvinut diagram anamnézy, kde byly podrobně formulovány otázky alergologické historie. Hlavní úkoly anamnézy:

  • Zjistit, zda existuje dědičná predispozice k alergickým onemocněním;
  • Určete vztah mezi faktory prostředí a vývojem nemoci;
  • Určete skupiny alergenů nebo jednotlivých alergenů, které by mohly způsobit alergie.

Během výslechu zjistili, jaké alergické choroby byly v minulosti nebo v současnosti v rodině pacienta, jak reaguje pacient na zavedení sér, vakcín a léků; je zaznamenána sezónnost onemocnění, jeho souvislost s běžným nachlazením; kde a kdy dojde k exacerbacím, jaké jsou životní a pracovní podmínky.

Například pacienti alergičtí na domácí prach se vyznačují „eliminačním účinkem“ - zlepšením stavu při odchodu z domova.
Pokud jste alergičtí na některé průmyslové alergeny, je charakteristický pondělní účinek - zhoršení v práci po víkendu. Souvislost s nachlazením je obvykle zjištěna u pacientů s infekčně-alergickou formou bronchiálního astmatu, rýmou. U pacientů se sennou rýmou je charakteristická výrazná sezónnost onemocnění - jeho zhoršení během kvetení rostlin, jejichž pyl je alergen. Dědičná predispozice je detekována u pacientů s reaginickým typem alergických reakcí.

Dotazování pacienta tedy již umožňuje určit možné alergeny a navrhnout typ alergické reakce. Tyto předpoklady musí být potvrzeny konkrétními vyšetřovacími metodami - kožními, provokativními a dalšími testy..

KOŽNÍ TESTY PRO ALERGIE.

Alergen se vstřikuje přes kůži, aby se zjistila specifická senzibilizace těla a vyhodnotil rozsah a povaha výsledného edému nebo zánětlivé reakce. Kožní testy (CP) se obvykle provádějí v remisi..

Rozlišujte mezi: kvalitativními a kvantitativními, přímými a pasivními kožními testy.

  • Kvalitativní testy odpovídají na otázku: existuje senzibilizace na tento alergen nebo ne? Pozitivní test dosud není považován za důkaz, že alergen je příčinou onemocnění. Příčinou může být další alergen, se kterým nebyl CP podán.Senzibilizace na alergen nemusí vždy vést k rozvoji alergické reakce. Proto je u lidí, kteří jsou prakticky zdraví, možné odhalit existenci senzibilizace na určité alergeny (domácí prach, streptokoky atd.) Bez známek rozvoje alergické reakce.
    Alergen lze považovat za příčinu onemocnění, pokud se pozitivní výsledky vzorku shodují s historickými údaji. Při absenci takové shody nebo nedostatečné exprese CP se provádějí provokativní testy.
  • Kvantitativní testy poskytují představu o míře senzibilizace. Jsou nastaveny k identifikaci individuální citlivosti a řešení problému počátečních dávek alergenu během specifické hyposenzitizace..
  • S Direct KP se alergen podává studovanému pacientovi. Při pasivním nebo nepřímém CP se pacientovo krevní sérum vstřikuje intradermálně do zdravého člověka a poté se do míst vpichu séra vstřikuje alergen (reakce Prausnitz-Küstner).

Doba výskytu kožní reakce po expozici alergenu a její povaha závisí na typu alergické reakce. Když reaginický typ (Typ I) se reakce objeví během prvních 10-20 minut. Je to kulatý nebo nepravidelný puchýř s pseudopodií. Barva puchýře je narůžovělá nebo bledá s kolem oblasti arteriální hyperémie. Tato reakce se nazývá puchýře, kopřivka nebo okamžitý typ.
Pro alergické procesy imunokomplexní a opožděné typy Kožní reakce (typy III a IV) je akutní zánět se všemi jeho příznaky - zarudnutí, otok, horečka v oblasti zánětu a bolestivost. Rozdíl mezi typy III a IV spočívá v době vývoje a intenzitě zánětu. U typu III je zánět výraznější, objevuje se po 4–6 hodinách a odezní po 12–24 hodinách. U typu IV dosahuje zánět maximálního vývoje za 24–48 hodin. Při použití CP je tedy možné určit typ alergické reakce na tento alergen.

Typy kožních testů (CP).

Aplikace CP (syn.: Kožní, epikutánní, patchové testy).
Používá se na alergická kožní onemocnění v oblastech kůže, které nejsou postiženy poškozením. Alergeny jsou nejčastěji různé chemikálie, včetně léků. Používají se v čisté formě nebo v roztocích v koncentracích, které nezpůsobují podráždění pokožky u zdravých lidí. Technika nastavení ovládání se liší. Obvykle se kousek gázy asi 1 cm 2 navlhčí roztokem alergenu a aplikuje se na kůži předloktí, břicha nebo zad. Poté přikryjte celofánem a zajistěte lepicí omítkou. Výsledky jsou vyhodnoceny po 20 minutách, 5-6 hodinách a 1-2 dnech.

Kontrolní body skarifikace.
U tohoto typu CP se různé alergeny aplikují ve formě kapek na kůži předloktí ve vzdálenosti 2-2,5 cm a skrz každou kapku s vertikutátorem nebo špičkou jehly oddělenou pro každý alergen dochází k poškození epidermis, aby nedošlo k poškození krevních cév. Varianta tohoto typu CP je injekční test (prick test) - injekcí jehlou se propíchne pouze pokožka. Skarifikace CP se používá v případech, kdy je podezření na přítomnost reaginického typu alergické reakce (s polinózou, atopickou formou bronchiálního astmatu nebo rýmou, Quinckeho edémem, kopřivkou). Odhalují pouze reaginický typ alergie. Posuzují se po 15-20 minutách..

Intradermální testy.
U tohoto typu CP je alergen injikován intradermálně. Tyto testy jsou citlivější než vertikutace, ale také méně konkrétní. Při jejich stanovení jsou možné komplikace ve formě orgánových a obecných alergických reakcí. Používají se k detekci senzibilizace na alergeny bakteriálního a plísňového původu a ke stanovení stupně citlivosti na neinfekční alergeny. Alergeny hmyzu blanokřídlých často neprovádějí pozitivní testy skarifikace, proto se také injikují intradermálně a reakce se detekuje ve formě systémových projevů. Test s těmito alergeny lze klasifikovat jako provokativní testy..

Prausnitz-Küstnerova reakce - pasivní reakce senzibilizace kůže.
To bylo používáno k diagnostice reaginového typu alergických reakcí, například na léky, potravinové alergie atd., Jakož i ke studiu vlastností reaginů a stanovení jejich titru. Principem reakce je intradermální podání krevního séra od pacienta zdravému příjemci a následné zavedení studovaných alergenů do těchto míst. Pokud jsou v krevním séru přítomny odpovídající protilátky, vyvine příjemce okamžitou kožní reakci v místě vpichu. V současné době se tato reakce používá jen zřídka kvůli riziku přenosu latentní infekce krevním sérem (virus hepatitidy atd.), Jakož i kvůli vývoji laboratorních metod pro stanovení reaginů.

Intenzita CP se hodnotí buď klady (od 0 do čtyř kladů), nebo průměrem papule nebo zánětlivým ložiskem. S ohledem na možnost vzniku závažných komplikací až po anafylaktický šok v případě nedodržení techniky nastavení CP, jakož i na složitost interpretace získaných výsledků, může CP provádět pouze v alergických místnostech speciálně vyškolený personál pod dohledem alergika.

PROVOCAČNÍ TESTY PRO ALERGII.


Provokativní testy (PT) jsou metodou etiologické diagnostiky alergických reakcí založenou na reprodukci této reakce zavedením alergenu do šokového orgánu. Podle typu šokového orgánu (tj. Orgánu, jehož léze vede k obrazu onemocnění), se rozlišují následující typy PT.

Konjunktivální PT se používá k identifikaci alergenů, které způsobují vývoj alergické konjunktivitidy nebo poliózy, ke které dochází u příznaků konjunktivitidy. Provádí se opatrně ze strachu, že způsobí prudkou zánětlivou reakci. Alergen se vnáší do dolního spojivkového vaku v koncentraci, která dává slabě pozitivní CP. Při pozitivní reakci se objeví slzení, hyperémie spojivek, svědění očních víček.

Nosní PT se používá při alergické rýmě. Nejbezpečnější. Alergen ve stejné dávce jako u spojivkového PT se vnáší do jedné poloviny nosu. S pozitivní reakcí se objeví kýchání, svědění v nose, výtok z nosu, potíže s dýcháním přes tuto polovinu nosu. Rinoskopické stanovení otoku sliznice skořápek, zúžení nosního průchodu.

Inhalační PT se obvykle používá pro bronchiální astma. Studie se provádí ve fázi remise v nemocničním prostředí. To je způsobeno skutečností, že se může okamžitě nebo později (po 4–24 hodinách) vyvinout závažný astmatický záchvat, a proto musí být pacient sledován. Před nastavením PT je charakter křivky vynuceného VC (FVC) zaznamenán na spirograf a jeho hodnota je vypočítána v první sekundě - FVC; také vypočítat Tiffneauův koeficient, což je poměr FVC; na VC v procentech. U zdravých lidí je to 70-80%. Poté subjekt inhaluje nejprve přes inhalátor kontrolní roztok, a pokud na něj nedojde k žádné reakci, roztoky alergenů postupně, počínaje od minimální koncentrace po koncentraci, která zajistí znatelnou reakci. Pokaždé se zaznamenávají spirogramy. Test se považuje za pozitivní, když FVC klesá! a poměr Tiffneau o více než 20%. Vyvinutý bronchospazmus zastavují bronchodilatátory. Se současným stanovením maximálního objemového výdechového průtoku v různých částech výdechové křivky je možné učinit závěr o umístění překážky (malé nebo větší dýchací cesty). Kapitola 19 popisuje PT pro exogenní alergickou alveolitidu.

Cold PT se používá pro studenou kopřivku. Kousek ledu nebo ledová láhev se umístí na kůži předloktí na 3 minuty. Pokud je test pozitivní, objeví se puchýřovitá kožní reakce 5-6 minut po ukončení působení chladu, obvykle odpovídající tvaru kousku ledu nebo lahve.

Thermal PT se používá pro tepelnou kopřivku. Na kůži předloktí se na 10 minut umístí odvažovací láhev s horkou vodou (40-42 ° C). Pozitivní reakce je charakterizována tvorbou puchýře.

Leukocytopenická PT se používá k etiologické diagnostice alergií na potraviny a někdy i na léky. Nejprve se u pacienta s potravinovou alergií na pozadí eliminační diety a za podmínek odpočinku na prázdný žaludek stanoví počet leukocytů v periferní krvi dvakrát za hodinu. Pak, pokud rozdíl mezi těmito dvěma studiemi nepřesáhne 0,3 x 10 u / l, dávají jídlo nebo lék, který je třeba užít. Po 30, 60 a 90 minutách se spočítá počet leukocytů. Test je považován za pozitivní, pokud je pokles leukocytů větší než 1 x 10 u / l. V případě alergie na léky je třeba dbát na to, aby se netestovalo, zda se v anamnéze vyskytly anafylaktické reakce. Negativní test nevylučuje senzibilizaci na testovaný alergen.

Trombocytopenická PT se také používá k etiologické diagnostice alergií na potraviny a někdy i na léky. Provádějte podobně jako leukocytopenické PT. Považováno za pozitivní, když je počet krevních destiček snížen o 25% nebo více.

Expoziční PT se používají jako orientační testy. Výzkumník, který nemá zjevné příznaky nemoci, je umístěn v podmínkách, kde mohou být podezřelé alergeny, například v lékárně, v dílně, ve stáji, v mlýně, na místech kvetoucích rostlin atd. Za přítomnosti vhodných alergenů v prostředí dochází k exacerbaci onemocnění.

Pomocí provokativních testů jsou dobře detekovány atopické a imunokomplexní typy alergických reakcí, je obtížnější detekovat alergickou reakci opožděného typu.


LABORATORNÍ STUDIE V ALERGII.


Různé imunologické výzkumné metody mají velký význam pro identifikaci existující senzibilizace. Výhodou těchto metod je jejich úplná bezpečnost pro pacienty..
Všechny imunologické metody odhalují pouze stav senzibilizace, to znamená, že naznačují, že tento jedinec již měl kontakt s tímto antigenem (alergenem). Nemohou sloužit jako indikátor nebo důkaz, že právě na tento antigen (alergen) dojde k alergické reakci, protože kromě senzibilizace je k provedení alergické reakce zapotřebí ještě řada dalších podmínek..

Jelikož existují 4 typy senzibilizace, mělo by se pro diagnostické účely použít několik metod k posouzení možného zapojení všech čtyř typů senzibilizace..

Identifikovat Typ Reagin Senzibilizace (typu I) lze použít následující reakce:

  • radioalergosorbentní test (RAST), který stanoví IgE protilátky proti různým typům alergenů;
  • radioimunosorbentní test (RIST), který umožňuje určit koncentraci celkového IgE. Vzhledem k tomu, že onemocnění reaginického typu jsou doprovázena zvýšením celkového IgE, bude zvýšená koncentrace tohoto Ig faktorem, který částečně potvrzuje účast reaginického mechanismu, a při absenci onemocnění bude sloužit jako rizikový faktor pro jeho vývoj;
  • Schultz-Daleova reakce je přímá a pasivní. Přímá reakce se obvykle používá v experimentech. K tomu se ze senzibilizovaného zvířete odebere orgán hladkého svalstva, umístí se do lázně a zaznamenají se jeho kontrakce. Poté se do lázně přidá alergen a vyhodnotí se intenzita křečí hladkého svalstva. Pasivní reakci lze použít k detekci reaginů v séru nemocných. K tomu se do lázně vloží kousek ilea opice a poté se přidá sérum pacienta.
    Protilátky jsou fixovány na střevě. Následné přidání alergenu v přítomnosti odpovídajících protilátek způsobuje intestinální kontrakci.
  • bazofilní testy - přímé a pasivní;
  • test uvolňování specifický pro histamin;
  • test degranulace žírných buněk.

Cytotoxický typ (typ II) se senzibilizací lze identifikovat pomocí:

  • různé varianty metody imunofluorescence;
  • Coombsův test na autoimunitní hemolytickou anémii;
  • radioimunologická metoda výzkumu;
  • Steffenova reakce.
  • různé metody pro stanovení cirkulujících imunitních komplexů v bioptickém materiálu komplexů uložených v tkáních a analýzy jejich složení;
  • stanovení revmatoidního faktoru;
  • různé metody detekce srážecích protilátek.
  • metody pro stanovení lymfokinů vytvořených po kontaktu s alergenem. Nejběžnějšími reakcemi tohoto typu jsou reakce inhibice migrace makrofágů a tvorby lymfotoxinu.


Metoda imunoblotu.

V současné době nejrozšířenější metoda imunoblotu.
Imunoblot (immunoblot) je vysoce specifická a vysoce citlivá referenční metoda pro detekci protilátek proti jednotlivým antigenům (alergenům). Imunoblot je vysoce informativní a spolehlivá metoda. Tato metoda výzkumu nemá žádné kontraindikace..


Alergická diagnostika Immuno CAP.

V posledních letech byly zavedeny nové technologie pro přesnější testovací diagnostiku alergií --- Alergická diagnostika Immuno CAP.
Volal „Allergochip Immuno CAP“.

Pro testy ImmunoCAP se používají umělé rekombinantní alergeny získané molekulárním klonováním. S jejich pomocí je získán výsledek takové přesnosti, které nelze dosáhnout tradiční metodou - jsou určeny nejen hlavní složky specifické pro daný alergen, ale i vedlejší. "Allergochip" umožňuje nejen přesně zjistit hlavní alergen, ale také látky, které mohou způsobit křížovou alergii.

Tato metoda umožňuje určit jak mírné formy alergické reakce (dermatitida), tak i nebezpečnější (astma).
Stanovení koncentrace IgE umožňuje nejen diagnostikovat tuto alergickou reakci, ale také předvídat další možný vývoj alergií.
Další důležitou výhodou testů ImmunoCAP je rychlost provedení - čtyři dny. Ale prozatím je tento k dispozici. ne pro všechny laboratoře.

1. Metody mikrobiologické diagnostiky infekčních nemocí: bakteriologické, bakteriologické, biologické, serolové, alergické a samotný imunitní systém. Jejich výhody a nevýhody.

Bakterioskopická (mikroskopická) metoda - soubor metod pro detekci a studium morfologických a tinktoriálních vlastností bakterií (mikrobů) v laboratorní kultuře, patologickém materiálu nebo vzorcích z vnějšího prostředí pomocí mikroskopie. Používají se ke stanovení diagnózy infekčního onemocnění nebo jiného procesu způsobeného mikroby a také k identifikaci izolované čisté kultury. Metoda bakterioskopického vyšetření je zvláště důležitá, pokud má mikrob morfologické a tinkturální vlastnosti nebo speciální lokalizaci v tkáních a buňkách těla. Pouze u některých infekcí postačuje k diagnostice morfologické vyšetření.

Pro diagnostiku většiny infekcí má mikroskopie jako první stupeň mikrobiologického výzkumu pouze pomocnou, přibližnou hodnotu..

Hodnota bakterioskopické metody spočívá v její jednoduchosti, dostupnosti technik a rychlosti získávání výsledků (30-60 minut nebo méně). Jeho specificita kvůli podobnosti morfologie různých druhů je však malá a jeho citlivost je omezená - rozlišení metody je v průměru 100 000 buněk na ml.

Mikroskopické metody spočívají v přípravě mikroskopických přípravků pro mikroskopii (nativních nebo barevných jednoduchými a složitými metodami) ze studovaného materiálu a jejich mikroskopii za použití různých typů mikroskopických technik (světlo, tmavé pole, fázový kontrast, luminiscenční, elektronické). Ve většině případů jsou výsledky mikroskopických studií pouze orientační. Mikroskopie materiálu nicméně může určit některé morfologické příznaky patogenů (přítomnost jader, bičíků, intracelulárních inkluzí atd.), Jakož i stanovit přítomnost nebo nepřítomnost mikroorganismů v zaslaných vzorcích.

BAKTERIOLOGICKÉ METODY

Klasický bakteriologický (virologický, mykologický) výzkum (nazývaný „zlatý standard“ mikrobiologické diagnostiky). Jeho účelem je izolovat a identifikovat patogen.

Bakteriologický (virologický, mykologický) algoritmus výzkumu sestává z následujících hlavních fází:

1) primární mikroskopie (volitelně);

2) primární setí k izolaci čisté kultury;

3) akumulace čisté kultury;

4) studium komplexu biologických vlastností izolované kultury a jeho identifikace. Identifikace čistých kultur (až do typu mikroorganismu) se provádí s přihlédnutím k morfologickým, tinkturním, kulturním, biochemickým, toxigenním a antigenním vlastnostem mikroorganismu. Většina studií zahrnuje stanovení antimikrobiální citlivosti v izolovaném patogenu. Pro epidemiologické hodnocení role mikroorganismu se vnitrodruhová identifikace provádí stanovením fagovarů, biovarů, rezistentů atd..

Klasický mikrobiologický výzkum má několik nevýhod. Nejprve je to poměrně zdlouhavý proces. Jeho minimální doba je 3–4 dny, ale než bude přesně identifikován izolovaný patogen, může uplynout mnoho dní i týdnů. Pro některé patogenní bakterie (Vibrio cholerae, bakterie záškrtu) byly vyvinuty zrychlené metody izolace a identifikace, ale také vám umožní získat odpověď nejdříve 36-48 hodin.

Úkolem mikrobiologického výzkumu je izolovat mikroorganismy od studovaného materiálu a identifikovat, tj. Určit jejich druh.

Základem mikrobiologického výzkumu je bakteriologická diagnostická metoda, jejíž podstatou je izolace mikroorganismů v čisté kultuře a jejich identifikace.

K identifikaci mikroorganismů jsou studovány následující vlastnosti:

5. Patogenní: patogenní enzymy - lecitináza, plazmatická koaguláza atd.; toxigenicita - schopnost produkovat exotoxiny (záškrt bacil, Staphylococcus aureus) (problematika byla podrobně diskutována v předchozím semestru, viz téma „Infekce. Patogenita a virulence

6. Antigenní (sérologické) (problematika byla podrobně diskutována v tématech sekce „Imunita“, viz předchozí semestr)

7. Fagolizovatelnost - schopnost lyžovat bakteriofágy (bakteriální viry): citlivost na terapeutické fágy (pro léčbu infekčního onemocnění) a citlivost na diagnostické fágy (v nových, typických); fágová typizace - stanovení citlivosti na typické fágy, provádí se za účelem stanovení zdroje a cest šíření mikroorganismů v prostředí nebo v kolektivu (problematika byla podrobně diskutována v tématu „Bakteriofágie“, viz odpovídající téma)

8. Citlivost na baktericiny a bakteriocinogeneze: provádí se za účelem stanovení zdroje a cest šíření mikroorganismů v prostředí nebo v kolektivu (viz téma „Genetika bakterií“)

9. Citlivost na antimikrobiální léčiva: antibiotika, chemoterapeutika a antiseptika (pro léčbu infekčních chorob, téma "Antibiotika"), dezinfekční prostředky (pro výběr dezinfekčního režimu viz téma "Asepse, antiseptika, dezinfekce, sterilizace").

Hlavní nevýhodou bakteriologické metody je doba trvání studie - od 3 do 5 dnů, v některých případech i více.

Výsledky mnoha diagnostických studií pro detekci patogenů do značné míry závisí na jejich typu a také na čase a způsobu odběru patologického materiálu. Povaha materiálu je dána klinickými rysy nemoci: měly by to být ty substráty nebo biologické tekutiny, u nichž je v této fázi onemocnění nejpravděpodobnější přítomnost patogenů. Úspěch bakteriologické metody do značné míry závisí na předběžné fázi, včetně odběru testovaného materiálu a jeho přepravy, registrace doporučení do bakteriologické laboratoře..

BIOLOGICKÉ METODY

Biologické metody jsou zaměřeny na stanovení přítomnosti toxinů patogenu ve zkušebním materiálu a na detekci patogenu (zejména pokud je počáteční obsah ve zkušebním vzorku nízký nebo pokud nelze patogen detekovat metodou očkování, například u virových a rickettsiálních onemocnění).

Zvířata jsou infikována, aby izolovala čistou kulturu patogenu v případech, kdy jej nelze získat jinými metodami (například když jsou studované objekty kontaminovány cizí mikroflórou, která potlačuje růst patogenu; s nevýznamným obsahem mikroorganismů nebo jejich přechodem na filtrovatelné formy).

Metody zahrnují infekci citlivých laboratorních zvířat (citlivých na podezřelý patogen) testovaným materiálem, následovanou izolací čisté kultury patogenu nebo stanovením přítomnosti mikrobiálního toxinu a jeho povahy nebo reprodukcí typického klinického obrazu..

Modelování experimentálních infekcí u citlivých zvířat je důležitým nástrojem ke studiu patogeneze onemocnění a povahy interakcí v systému mikroorganismus - makroorganismus. Pro biologické testy se používají pouze zdravá zvířata určité tělesné hmotnosti a věku..

Infekční materiál se vstřikuje orálně do dýchacích cest, intraperitoneálně, intravenózně, intramuskulárně, intradermálně a subkutánně, do přední komory oka, lebečním otvorem, suboccipitální (do větší mozkové cisterny). Krev se odebírá zvířatům in vivo, exsudát z pobřišnice, po smrti krev, kousky různých orgánů, CSF, exsudát z různých dutin.

Nevýhody: a) nutnost udržovat vivárium; b) dobu trvání studie. Navíc ani při laboratorní infekci není zdaleka vždy možné izolovat patogen, který je zvláště charakteristický pro virové infekce..

SEROLOGICKÁ metoda spočívá ve stanovení titru specifických protilátek v séru pacienta. Pro jeho implementaci se používají různé imunitní reakce, jak jednoduché (aglutinace a její varianty), tak komplexní (RSK, ELISA atd.).

Klasická serodiagnostika je založena na:

1). Stanovení protilátek proti patogenu v diagnostickém titru;

2) Detekce protilátek proti původci řady infekčních onemocnění ve studovaném krevním séru nestačí k provedení diagnózy, protože může odrážet přítomnost postinfekční nebo postvakcinační imunity. Proto se vyšetřují spárovaná séra pacienta, odebírají se v prvních dnech onemocnění a po 7-10 dnech (někdy může být tento interval delší). V tomto případě se hodnotí zvýšení titru protilátky. Zvýšení titru protilátek čtyřikrát nebo více naznačuje infekční povahu protilátek.

3) U exotických infekčních onemocnění, stejně jako u hepatitidy, infekce HIV a některých dalších nemocí, samotná skutečnost stanovení protilátek naznačuje, že pacient je infikován a má diagnostickou hodnotu.

Sérologická diagnostická metoda se používá od konce prvního do začátku druhého týdne onemocnění.

K detekci protilátek se do testovacího séra přidá známý antigen. Tyto léky, nazývané diagnostické, jsou suspenzí usmrcených mikroorganismů (jejich jednotlivých antigenů) nebo erytrocytů (latexové částice), na nichž jsou mikroorganismy nebo jejich antigeny adsorbovány.

SPRÁVNÁ IMUNITNÍ DIAGNOSTICKÁ METODA

Vlastní imunitní metoda (expresní)

Účel: hledat antigeny mikrobů v patologickém materiálu pomocí sérologických imunitních odpovědí (viz reakce v dodatku 6 v části 4).

Sérologické reakce imunity mezi antigeny (AG) a protilátkami (AT) se nazývají. Determinant hypertenze se váže na aktivní centrum AT. Spojení AG a AT se provádí vodíkovými a hydrofobními vazbami, interakcí iontů, Coulombovými a van der Waltzovými silami. Síla spojení mezi AG a AT je zajištěna nejen vazebnými silami, ale také optimální adaptací aktivního místa AT na determinant AG. Sérologické reakce probíhají ve dvou fázích. První - specifická neviditelná - je interakce AG s AT. Druhá fáze - viditelná - se objevuje v závislosti na typu reakce, který je určen vlastnostmi AG, AT a dalších reakčních složek. Existuje několik typů reakcí: aglutinace, srážení (imunitní difúze), lýza, neutralizace atd..

Aglutinační reakce

V aglutinační reakci (RA) je antigen zapojen ve formě korpuskulární částice. Mohou to být suspenze mikroorganismů, tělesných buněk, například erytrocytů.

Po smíchání se specifickým antisérem se vizuálně rozlišitelné vločky - imunitní komplexy slepí a usadí.

Aglutinační reakci lze nastavit kvalitativně - na sklo a kvantitativně - ve zkumavkách, kde se připravují ředění séra.

Nepřímá (pasivní) hemaglutinační reakce (RNGA) je druh úpravy RA.

Jeho podstata spočívá ve skutečnosti, že molekuly antigenu jsou adsorbovány na povrchu erytrocytů (po ošetření erytrocytů taninem nebo formalinem). Takto „nabité“ erytrocyty AG získávají schopnost aglutinovat s imunitním sérem specifickým pro tento AG.

Tvorba komplexu AG-AT také znamená slepení erytrocytů (hemaglutinát se tvoří na dně jamky nebo zkumavky ve formě „obráceného deštníku“), což je snadné vzít v úvahu. Erytrocyty se tedy přímo nepodílejí na tvorbě komplexu AG-AT, ale slouží jako jeho indikátory.

RNGA je citlivější než RA.

Coombsova reakce

Toto je test na detekci neúplných protilátek, které samy o sobě nemohou aglutinovat antigeny, ale jsou k nim schopné se připojit. Reakce probíhá ve fázích: do krevního séra subjektu se přidá erytrocytový diagnostik - známé antigeny adsorbované na erytrocytech. Po inkubaci se erytrocyty promyjí a přidá se králičí anti-lidský globulin AT. Výsledkem je, že antiglobulinové sérum slepuje erytrocyty prostřednictvím na nich vytvořených komplexů AG-AT.

Existují dva typy Coombsovy reakce: přímá a nepřímá:

• Přímá metoda: detekce protilátek proti rhesus adsorbovaných na erytrocytech novorozence.

Krev je odebrána novorozenci, erytrocyty jsou promyty a přidány k nim

antiglobulinové protilátky: fenomén „mřížky“ je realizován - dochází k aglutinaci očí viditelných erytrocytů

• Nepřímá metoda: detekce protilátek proti rhesus v mateřském séru.

/// 1. Standardní Rh-pozitivní erytrocyty se přidají do zkumavky mateřským sérem. Protilátky proti matce v séru matky se adsorbují na erytrocyty.

2. Vložte antiglobulinové sérum (antiglobulinové protilátky) do zkumavky: je realizován fenomén „mřížky“ - dochází k aglutinaci očí viditelných erytrocytů

Srážení reakce

Jemně dispergovaný (rozpustný antigen) je zapojen do srážecí reakce (RP). Při kontaktu s protilátkami - precipitiny se vytváří sraženina.

Srážecí reakci lze provádět v kapalném médiu (v úzkých zkumavkách) a v gelu (v Petriho miskách). Při nastavování RP v úzkých zkumavkách se na transparentní srážecí sérum (0,2 ml) nanese kapalina obsahující jedno z činidel, například průhledný extrakt z mikrobiálních buněk (0,2 ml). V pozitivních případech se po 1–5 minutách na rozhraní mezi kapalinami vytvoří šedobílý prstenec. RP, stejně jako RA, vstupuje do elektrolytu, ale má vyšší citlivost.

//// Schémata srážkových reakcí ve zkumavce (A) a agaru (B).

Jednou z odrůd RP v gelu je reakce pro stanovení toxigenicity difterického bacilu. Za tímto účelem se do Petriho misky na živné médium vloží proužek sterilního filtračního papíru namočeného v antitoxickém anti-difterickém séru. Poté se miska naočkuje testovanými kulturami ve formě náplastí ve vzdálenosti 0,6-0,8 cm od okraje papíru. Misky se inkubují při 37 ° C po dobu 24 hodin. V přítomnosti toxigenní kultury v místě interakce toxinu s antitoxinem se vytvářejí srážecí linie ve formě oblouků (vousy, půlkruhy).

Imunofluorescenční reakce (RIF)

Přímka (metoda Koons). Mikroorganismy ošetřené protilátkami značenými fluorochromy jsou schopné zářit ve fluorescenčním mikroskopu.

Nepřímý. V první fázi mikroorganismy interagují se specifickým sérem. Vytvořený imunitní komplex je dále ovlivněn antiglobulinovým sérem značeným fluorochromem. Imunitní komplex s tímto konjugátem září ve fluorescenčním mikroskopu.

Reakce fixace komplementu (CBC)

Jedná se o reakci na lýzu antigenu (např. Cytolýzu, bakteriolýzu) protilátkami za účasti komplementu. Pokud je antigenem bakteriální buňka nebo virus, není lýza doprovázena viditelnými projevy. Proto, aby se zjistila přítomnost komplexu AG + AT + komplementu v experimentálním systému, kde není známa jedna ze složek (AG nebo AT), používá se indikátorový systém AG + AT, kde jsou obě složky známé a lýza antigenu se dobře projevuje, protože erytrocyty jsou brány jako AG... Reakce je založena na schopnosti komplementu - komplexního systému proteinů normálního séra obratlovců - fixovat se na komplex AG-AT a následné lýze antigenu. V RSC je zahrnuto pět komponent: experimentální systém AG-AT, ve kterém je jedno z činidel neznámé, systém doplňků a indikátorů.

Indikátor - hemolytický systém se skládá ze suspenze beranských erytrocytů a králičího hemolytického séra získaného imunizací beranskými erytrocyty. Pokud si AG a AT v experimentálním systému navzájem odpovídají, pak výsledkem této interakce je vazba komplementu. Indikační systém detekuje volný, nevázaný doplněk. Pokud komplement zůstane volný, bude se vážit na komplex erytrocytů - hemolytické sérum a bude lyžovat erytrocyty. Přítomnost hemolýzy tedy znamená negativní výsledek CSC a absence hemolýzy znamená pozitivní výsledek..

Imunoanalýza

Vysoce citlivá metoda pro detekci AG nebo AT na základě reakce AG-AT pomocí enzymem značeného AG nebo AT.

Schematický diagram enzymového imunotestu pro detekci AT je následující. Známý AH (virus, protein) - diagnostické - je fixován na pevné fázi. Přidá se k němu sérum subjektu s neznámým AT. Po inkubaci a promytí zůstávají antigeny specifické AT na antigenu, pokud jsou v séru subjektu. K detekci komplexu AG - AT se do něj přidá enzymem značené králičí antiglobulinové sérum (AGS-F). K získání tohoto séra je králík imunizován lidskými globuliny. Sérum získané z králíka je označeno enzymem, například křenovou peroxidázou. Pokud testovací sérum obsahuje AT až AG (diagnostické), bude sloužit jako antigen pro antiglobulinové sérum. Po druhém promytí lze vzniklý komplex AG + AT + AGS-F detekovat přidáním substrátu k enzymu a indikátorem produktů degradace substrátu. Změna barvy indikátoru indikuje přítomnost požadovaného AT v séru subjektu.

ALERGICKÁ DIAGNOSTICKÁ METODA.

U mnoha infekčních onemocnění se vyvíjí stav přecitlivělosti s opakovaným zavedením patogenu nebo jeho metabolických produktů. Tento stav, nazývaný infekční alergie, je charakteristický pro tuberkulózu, tularemii, brucelózu, sopla, syfilis, antrax, toxoplazmózu, příušnice, herpes simplex a řadu dalších infekcí..

K identifikaci infekční alergie se používají alergické diagnostické testy, do nichž se přísně intradermálně injikuje vhodný alergen. Přítomnost hyperemie a infiltrace naznačuje pozitivní výsledek reakce, tj. Přítomnost infekční alergie..

Alergická diagnostická metoda je založena na alergické reakci - hypersenzitivní reakci zpožděného typu (HRT).

Tvorba HRT reakce není založena na humorální, ale na buněčné imunitní reakci těla na první (senzibilizující) kontakt s určitým antigenem. Senzibilizace je spojena s převládající proliferací T-lymfocytů nesoucích receptory specifické pro daný alergen. Poté zůstává v těle po dlouhou dobu množící se klon senzibilizovaných T-lymfocytů, který při opětovném vstupu do těla reaguje specifickým alergenem..

Detekce buněčné imunitní odpovědi - hypersenzitivita opožděného typu (HRT), schéma

* Intradermální podávání bakterií Ag

* Po 48 - 72 hodinách se objeví zánět

* Změřte množství zarudnutí a papulí

• Lymfokiny uvolňující Ag Tx, aktivace TCTL, aktivace fagocytů, zánět

DTH reakce zahrnují: T-pomocníky (stimulují tvorbu T-efektorů prostřednictvím IL-2) → T-efektory (produkují lymfokiny - chemoatraktanty a přitahují makrofágy k ohnisku zánětu) → makrofágy (produkují monokinové mediátory) → mononukleární infiltrát v místě injekce alergenu → hodnota infiltrace závisí na stupni senzibilizace těla a dosahuje maxima po 24-48 hodinách

Alergické diagnostické testy vám umožňují diagnostikovat tuberkulózu (Mantouxův test), brucelózu (Burneův test), tularemii (test s tularinem), antrax (test s antraxinem), chancre (Ducreyův test), malomocenství (Mitsudův test) a druhý dokonce rozlišovat tuberkuloidní (pozitromin-pozitivní) forma z lepromatózní (lepromin-negativní).

Pozitivní alergický kožní test naznačuje, že zavedení alergenu během testu se opakuje, to znamená, že jedinec byl v minulosti v kontaktu s mikrobiální látkou. Zde ovlivňuje hlavní nevýhodu diagnostické hodnoty kožních alergických testů, protože mohou být pozitivní nejen u infikovaných, ale také u osob očkovaných proti těmto chorobám, stejně jako u osob, které již před mnoha lety onemocněly, včetně nosičů, tj. pozitivní test u zdravých jedinců naznačuje pouze kontakt s mikrobiálním antigenem.

Při určování povahy onemocnění má skutečnou diagnostickou hodnotu pouze přechod z negativního kožního testu na pozitivní, který je pozorován v průběhu onemocnění. Navíc obrat reakce, to znamená zvýšení závažnosti jejího projevu během opětovného vyšetření, slouží také jako základ pro podrobnější vyšetření infekce tímto patogenem..

Při užívání určitých léků z kortikosteroidních hormonů, imunosupresiv, stejně jako u některých onemocnění (sarkoidóza, Hodgkinova choroba a některé nádory), je obtížné vzít v úvahu výsledky alergických testů, protože v těchto případech je pozorována tzv. Anergie, tj. Výrazné snížení celkové kožní reaktivity..

Navíc, když se u dětí objeví vyrážka, může dítě také trpět některými chorobami, jako jsou spalničky, plané neštovice, může dojít k anergii a během tohoto období, kdy se provádí test Mantoux, se z dítěte pozitivního na tuberkulin může dočasně stát negativní tuberkulin, tj. Falešně negativní výsledek.


Publikace O Příčinách Alergií